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Etude de la réponse immunitaire virale préexistante anti-AAV chez l'homme
L immunité préexistante dirigée contre la capside des virus associés aux adénovirus (AAV) chez l Homme constitue une limitation majeure à l efficacité du transfert de gène à l aide de vecteurs AAVr. En particulier, les réponses cellulaires cytotoxiques dirigées contre l AAV se sont trouvées être un...
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| Auteurs principaux : | , , , , |
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| Collectivités auteurs : | , , , |
| Format : | Thèse ou mémoire |
| Langue : | français |
| Titre complet : | Etude de la réponse immunitaire virale préexistante anti-AAV chez l'homme / Rebecca Xicluna; sous la direction de Oumeya Adjali |
| Publié : |
2019 |
| Accès en ligne : |
Accès Nantes Université
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| Note sur l'URL : | Accès au texte intégral |
| Note de thèse : | Thèse de doctorat : Immunologie : Nantes : 2019 |
| Sujets : |
| Résumé : | L immunité préexistante dirigée contre la capside des virus associés aux adénovirus (AAV) chez l Homme constitue une limitation majeure à l efficacité du transfert de gène à l aide de vecteurs AAVr. En particulier, les réponses cellulaires cytotoxiques dirigées contre l AAV se sont trouvées être un défi à caractériser en raison de la faible fréquence des LT CD8+ circulants spécifiques de la capside. L ELISpot IFN-g anti-AAV nous a permis de mettre en évidence une prévalence importante des cellules immunitaires spécifiques de la capside des différents sérotypes dans une cohorte de 90 donneurs sains. Des techniques dérivées de l ELISpot (Fluorospot et Cytokine Capture Assay) nous ont permis de montrer que cette immunité est majoritairement médiée par les LT CD8+ et que ceux-ci pouvaient présenter des profils cytokiniques différents et dépendant du sérotype. D autre part, nous avons pu mettre en évidence la présence de lymphocytes T (LT) CD8+ spécifiques de la capside dans les PBMC de donneurs sains grâce à un enrichissement magnétique à l aide des tétramères de CMH classe I. Nous avons pu identifier une sous-population de lymphocytes effecteurs mémoire (TEMRA) parmi les LT CD8+ spécifiques de la capside. De plus, nous avons observé une corrélation positive entre les réponses ELISpot IFN- g et le pourcentage des TEMRA parmi les LT CD8+ spécifiques de la capside. Ainsi, les cellules TEMRA pourraient jouer un rôle dans la réactivation des réponses cellulaires mémoire préexistantes contre la capside des AAV recombinants chez les patients traités par thérapie génique. Les résultats de nos travaux encouragent le développement de nouvelles technologies associant haute sensibilité de détection et évaluation polyfonctionnelle des lymphocytes T spécifiques de manière à mieux prédire l impact des réponses immunitaires cellulaires préexistantes spécifiques après transfert de gène à l aide d AAV chez l Homme. Pre-existing immunity against Adeno- Associated Virus (AAV) capsid in humans is a major limitation to successful clinical translation of AAVbased gene transfer products. In particular, detection and characterization of cytotoxic cellular responses to AAV has been found to be a challenge due to the low frequency of circulating capsidspecific CD8+ T cells. IFN-g anti-AAV ELISpot allowed us to highlight a significant prevalence of capsid-specific immune against different serotypes in a cohort of 90 healthy donors. Additional assays derived from the ELISpot technology (Fluorospot and Cytokine Capture Assay) have allowed us to show that this immunity is mainly mediated by CD8+ T cells and that cytokinic profiles could be dependent on the serotype. On another hand, we have been able to detect capsid-specific CD8+ Lts in healthy human PBMCs using a MHC class I tetramer-based magnetic enrichment method. We have identified a subpopulation of memory effector lymphocytes (TEMRA) among capsid-specific CD8+ T and have observed a positive correlation between positive IFN-g ELISpot responses and the percentage of TEMRAs among those specific T cells. Thus, TEMRA cells could play a role in triggering cellular responses against recombinant AAVs in gene therapy-treated patients. Altogether, our data highlight the need of new technologies combining high sensitivity detection and polyfunctional evaluation of AAV specific T cell responses to better predict the impact of preexisting anti-AAV cellular immunity on gene transfer in AAV-based clinical trials. |
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| Variantes de titre : | Study of the pre-existing anti-AAV viral immune response in humans |
| Notes : | Titre provenant de l'écran-titre Ecole(s) Doctorale(s) : École doctorale Biologie-Santé (Rennes) Partenaire(s) de recherche : Université Bretagne Loire (COMUE), Thérapie Génique Translationnelle des Maladies Génétiques (Nantes) (Laboratoire) Autre(s) contribution(s) : Ignacio Anegon (Président du jury) ; Anna Salvetti, Federico Mingozzi (Rapporteur(s)) |
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