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Caractérisation de productions rétrovirales dérivées du virus de la leucémie murine (MLV) et réévaluation des étapes précoces de l'infection par ces vecteurs
Après l'entrée dans la cellule cible, le génome ARN des rétrovirus est rétrotranscrit en ADN double brin. L'ADN viral néosynthétisé (provirus) est transporté dans le noyau au sein de complexes nucléoprotéiques de préintégration ou PIC. Dans le cas des rétrovirus leucémogènes MLV, la transl...
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| Auteurs principaux : | , |
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| Collectivité auteur : | |
| Format : | Thèse ou mémoire |
| Langue : | français |
| Titre complet : | Caractérisation de productions rétrovirales dérivées du virus de la leucémie murine (MLV) et réévaluation des étapes précoces de l'infection par ces vecteurs / Fatima Serhan; sous la direction de Philippe Moullier |
| Publié : |
2003 |
| Description matérielle : | 162 f. |
| Note de thèse : | Thèse de doctorat : Médecine. Virologie : Nantes : 2003 |
| Disponibilité : | Publication autorisée par le jury |
| Sujets : |
| Résumé : | Après l'entrée dans la cellule cible, le génome ARN des rétrovirus est rétrotranscrit en ADN double brin. L'ADN viral néosynthétisé (provirus) est transporté dans le noyau au sein de complexes nucléoprotéiques de préintégration ou PIC. Dans le cas des rétrovirus leucémogènes MLV, la translocation nucléaire du PIC nécessite l'entrée de la cellule cible en mitose et la dissociation de la membrane nucléaire. Une fois dans le noyau, l'ADN viral peut soit s'intégrer dans le génome cellulaire soit se circulariser et être dégradé. Les cercles d'ADN viral (à 1 ou 2 LTR) sont classiquement utilisés comme index de valeur de l'entrée des PIC dans le noyau. Dans la première partie de ce travail, nous avons utilisé les cellules humaines A549 pour la production de virus MLV recombinants. Nous avons observé que les virions produits par ces cellules ont un défaut d'infectiosité lié a une réduction importante de la quantité des cercles proviraux de type 2-LTR dans les cellules cibles, suggérant un défaut de translocation au noyau des PIC. Nous avons alors effectué une analyse précise des formes d'ADN virales néosynthétisées. En opposition à ce qui est décrit dans la littérature, nous montrons que (1) les jonctions 2-LTR sont détectées dans le cytoplasme des cellules cibles dès deux heures post-infection; (2) leur formation n'attend pas la mitose. Nos résultats contredisent le dogme selon lequel les formes 2-LTR constituent un marqueur du compartiment nucléaire. Par ailleurs, la présence de ces formes très tôt dans le cycle de réplication nécessite une réévaluation des événements moléculaires qui président à leur formation. Following viral entry in the target cell, the retroviral RNA is reverse transcribed into a double-stranded DNA. Before it integrates into host genome. the neosynthesized DNA resides within preintegration nucleoprotein complexes (PIC) that translocate to the nucleus. In the case of the murine leukemia viruses (MLV). association of the PIC to the nucleus awaits for the breakdowm of the target cell nuclear membrane that occurs during mitosis. The nucleus-associated retroviral DNA either integrates into the host genome or circularizes into 1 and 2 LTR-containing bNA circles before degradation. Hence, detection of 1 and 2 LTR-containing DNA junctions is commonly used as an index of nuclear translocation. During the first part of my work, we demonstrated that a defect in infectivity of MLV vectors that are produced on the A549 human cell line is associated with a dramatic reduction in the formation of 2-LTR bNA circles in the target cells. According to the ge eral vue, this would be expected to be due to a defect in the nuclear translocation process of the PIC. We evaluated this aspect by analyzing the production of different molecular forms of neosynthesized viral bNA. In contrast with previousiy published data, we demonstrate that (1) 2-LTR junctions, previousiy described as strict nuclear resident forms, are produced in the cytoplasm as early as 2 hours post- infection, and (2) 2-LTR junctions are mode before mitosis takes place. These findings set new bases for a r eevaluation of the molecular events that accompany the retroviral replication cycle. |
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| Bibliographie : | Bibliogr. f. 123-162 |