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Biodégradation oxydative des polychlorobiphényles (PCB) par les bactéries : caractérisation de la biphényle dioxygénase de Pseudomonas sp. B4 et conception d'un biocapteur à PCB
LA BIPHENYLE DIOXYGENASE (BDO) CATALYSE LA DIHYDROXYLATION DU BIPHENYLE ET DES POLYCHLOROBIPHENYLES (PCB) CHEZ LA BACTERIE PSEUDOMONAS SP. B4, POUR FORMER UN CIS-DIHYDRODIOL. C'EST UNE ENZYME A TROIS COMPOSANTES : UNE DIOXYGENASE (ISP), UNE FERREDOXINE (FER) ET UNE REDUCTASE (RED). LE LOCUS BPH...
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| Format : | Thèse ou mémoire |
| Langue : | français |
| Titre complet : | Biodégradation oxydative des polychlorobiphényles (PCB) par les bactéries : caractérisation de la biphényle dioxygénase de Pseudomonas sp. B4 et conception d'un biocapteur à PCB / DAVID RODARIE; sous la direction de YVES JOUANNEAU |
| Publié : |
1999 |
| Description matérielle : | 1 vol. (201 p.) |
| Note de thèse : | Thèse de doctorat : Biologie : Grenoble 1 : 1999 |
| Sujets : |
| Résumé : | LA BIPHENYLE DIOXYGENASE (BDO) CATALYSE LA DIHYDROXYLATION DU BIPHENYLE ET DES POLYCHLOROBIPHENYLES (PCB) CHEZ LA BACTERIE PSEUDOMONAS SP. B4, POUR FORMER UN CIS-DIHYDRODIOL. C'EST UNE ENZYME A TROIS COMPOSANTES : UNE DIOXYGENASE (ISP), UNE FERREDOXINE (FER) ET UNE REDUCTASE (RED). LE LOCUS BPHA CODANT LA BDO B4 A ETE CLONE, SEQUENCE ET SUREXPRIME CHEZ E. COLI. LES COMPOSANTES ISP, FER ET RED ONT ETE ISOLEES, ET CARACTERISEES AU NIVEAU BIOCHIMIQUE ET SPECTROSCOPIQUE. ISP ET FER POSSEDENT CHACUNE UN CENTRE 2FE-2S DE TYPE RIESKE. NOUS AVONS ISOLE LA COMPOSANTE RED DE COMAMONAS TESTOSTERONI B-356, PLUS FACILE A OBTENIR QUE CELLE DE B4, L'AVONS COMBINEE AUX COMPOSANTES ISP ET FER DE B4 AFIN DE RECONSTITUER UN COMPLEXE CATALYTIQUE ACTIF IN VITRO. LA CINETIQUE D'OXYDATION DU NADH PAR LE COMPLEXE BDO A ETE DETERMINEE IN VITRO PAR SPECTROSCOPIE DE FLUORESCENCE, L'OXYDATION CONCOMITANTE DU BIPHENYLE ET DES PCB AYANT ETE SUIVIE PAR CHROMATOGRAPHIES HPLC ET CPG/SM. UNE BONNE CORRELATION A ETE OBSERVEE ENTRE L'OXYDATION DU NADH, LA DEGRADATION DU BIPHENYLE OU DU 4,4-CHLOROBIPHENYLE ET L'APPARITION DU DIHYDRODIOL. DANS LE CAS DES COMPOSES DOUBLEMENT SUBSTITUES EN ORTHO, QUI NE SONT PAS OXYDES PAR L'ENZYME, ON OBSERVE UNE OXYDATION DU NADH NON COUPLEE A CELLE DU SUBSTRAT AROMATIQUE. LA REGION SITUEE EN AMONT DU LOCUS BPHA A ETE CLONEE, SEQUENCEE ET FUSIONNEE AU GENE RAPPORTEUR GFP (GREEN FLUORESCENT PROTEIN) DANS LE BUT D'ELABORER UN BIOCAPTEUR BACTERIEN A PCB. CETTE REGION POSSEDE 2 CADRES DE LECTURE DE FONCTION INCONNUE (ORF), DONT L'UN EST HOMOLOGUE A UN ORF PRESENT DANS L'OPERON DE DEUX SOUCHES DE PSEUDOMONAS DEGRADANT LE NAPHTALENE. INTRODUITES CHEZ LA SOUCHE B4, LES CONSTRUCTIONS N'ONT INDUIT AUCUN SIGNAL DE FLUORESCENCE SIGNIFICATIF EN PRESENCE DE BIPHENYLE. CEPENDANT, LA SOUCHE B4 PEUT ETRE UTILISEE DIRECTEMENT POUR DETECTER LE BIPHENYLE DANS UNE GAMME DE 10 A 100 PPM, PAR MESURE DE LA FLUORESCENCE ENDOGENE DE LA BACTERIE. |
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| Bibliographie : | 248 ref. |